看完這些你就知道質(zhì)粒的應(yīng)用技術(shù)了

　　今天讓我們一起來了解一下質(zhì)粒的應(yīng)用技術(shù)
 

　　了解了質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和它的構(gòu)建過程之后，我們來看質(zhì)粒在基因工程中的應(yīng)用。
 

　　pBR322質(zhì)粒作為一種常用的基因克隆載體，在實際應(yīng)用中有著非常重要的地位，其中一個突出的例子就是應(yīng)用pBR322 作為克隆載體對水稻的葉綠體光誘導(dǎo)基因psbA 進行結(jié)構(gòu)分析。
 

　　將水稻葉綠體的DNA，用EcoRI核酸限制性內(nèi)切酶消化之后，放入含有溴化乙錠的低熔點(LMP)的1%瓊脂糖凝膠中作電泳分離。
 

　　從LMP中分離出分子大小為1.8~2.5kb之間的DNA片段，再與同樣經(jīng)過了EcoRI核酸限制性內(nèi)切酶切割并用堿性磷酸酶作了脫磷酸處理的pBR322質(zhì)粒連接。
 

　　然后，將混合物轉(zhuǎn)化到大腸桿菌5346菌株，培養(yǎng)在氨芐青霉素選擇平板上，形成Ampr轉(zhuǎn)化子菌落群體。這樣就構(gòu)成了由EcoRI核酸限制性內(nèi)切酶切割的水稻葉綠體DNA基因組庫。
 

　　用Ampr轉(zhuǎn)化子菌落與32P放射性標記的玉米psbA DNA 探針作菌落雜交，可以分離出其中的陽性克隆體。從這些陽性克隆體中分離出來的重組體質(zhì)粒DNA，經(jīng)過進一步的分析，就能測出水稻葉綠體基因psbA的序列。
 

　　利用pBR322作為載體重組人體的抑生長激素也是一個經(jīng)常提到的應(yīng)用例子。其過程和水稻葉綠體基因重組大同小異，只是除了在質(zhì)粒載體上插入抑生長激素基因外，還將含有l(wèi)ac操縱子起始部分的片段(包括啟動子、操縱區(qū)、核糖體結(jié)合位點和β-半乳糖苷酶的主要部分)插在抑生長激素基因的旁邊。
 

　　由于有了lac操縱子的控制，重組基因產(chǎn)生的蛋白質(zhì)的調(diào)節(jié)就變得比較容易了。